产品货号:
MT0190
中文名称:
Bsu DNA聚合酶
英文名称:
Bsu DNA Polymerase
产品规格:
500U
发货周期:
1~3天
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Bsu DNA聚合酶是具有链置换活性的DNA恒温扩增聚合酶,主要应用于重组酶聚合酶扩增(RPA)。重组酶UvsX与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列;一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应,Bsu DNA聚合酶启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。
本Bsu DNA聚合酶来源于嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus subtilis),系将Bacillus subtilis DNA聚合酶(Bsu) I基因的前296个AA截去而得。该酶保留了Bsu I的5'-3'聚合酶活性,但是缺失了5'-3'核酸外切酶结构域,该酶自身缺失3'-5'核酸外切酶活性,可用于重组酶扩增。
- 随机引物法标记;
- cDNA第二条链的合成;
- 单个dA的加尾;
- 链置换的DNA合成。
在37℃条件下,30min内参入10nmol酸性不容物定义为1个活性单位。
组分 | 规格 |
Bsu DNA聚合酶(10U/μL) | 50μL |
10×Bsu Reaction Buffer | 1mL |
保存:-20℃,避免反复冻融,有效期2年。
50mM Tris-HCl(pH8.0),50mM KCl,1mM DTT,37.5% Glycerol。
1×Bsu Reaction Buffer:
50mM NaCl,10mM Tris-HCl(pH7.5),10mM MgCl2,1mM DTT。
75℃加热20分钟。
- 由于缺乏3'-5'核酸外切酶活性,Bsu DNA聚合酶不能切除3'未配对的突出末端,因而不适用于生成平齐末端。
- 25℃时Bsu DNA聚合酶保留50%的活性,是同温度下Klenow片段(3'-5'exo-)的两倍。
- 按照如下体系配制反应:
成分 用量 Plasmid DNA 100ng 10×Bsu Reaction Buffer 5μL Random9 (100μM) 2μL dNTP mixture(10mM) 2μL RNase-free H2O 至50μL - 混匀后95℃ 5min,然后冰上放置5min,分别加入不同剂量Bsu DNA聚合酶,分别在25℃和37℃孵育3h,电泳检测各组产物如下图
泳道1-2:0μL,
泳道3-4:0.5μL,
泳道5-6:1μL,
泳道7-8:2μL,
泳道9-10:4μL,
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